产品组成
产品组成 | GTM-01A | GTM-01B |
2×Taq Master Mix | 1mL*5 | (1mL*5)*5 |
产品简介
Taq Master Mix是由PCR扩增反应所需的Taq酶、dNTPs、MgCl2以及PCR稳定剂和增强剂组成的预混体系,浓度为2×。预配好的PCR混合体系扩增长度可达8kb,能对4kb及其以下长度的片段进行高效地扩增。使用时只需再加入模板和引物并稀释到1倍浓度即可进行PCR反应,使操作更加简单快捷,最大限度地减少了人为误差和污染。
产品特点
扩增高效:以λDNA为模板,扩增长度可达8kb,能高效扩增≤4kb片段。
灵敏度好:可从0.05ng人基因组DNA模板中扩增出特定基因片段。
稳定性好:反复冻融几十次,4℃放置30天,室温放置一周后,扩增性能不受影响。
操作快捷:PCR反应所必需试剂全集于一管之中,数分钟即可完成反应体系配制。
保存与运输条件
-20℃避光储存。有效期18个月。
冰袋运输。本品避免反复冻融。
操作说明
1 常用反应体系(50μL)
GeWei®2×Taq Master Mix | 25μL |
上游引物 | 0.2-1.0μM(终浓度) |
下游引物 | 0.2-1.0μM(终浓度) |
模板 | 1-50ng(质粒)/10ng-1μg(基因组) |
ddH2O | 至 50μL |
*Mg2+终浓度2mM
2 推荐PCR反应程序
当扩增片段<3K: 当扩增片段<3K(推荐引物长度≥30bp):
循环数 | 温度 | 时间 |
| 循环数 | 温度 | 时间 |
1 | 94℃ | 90s |
| 1 | 94℃ | 5min |
30 | 94℃ | 20s |
| 30 | 94℃ | 5s |
50-60℃ | 20s |
| 68℃ | 1kb/60s |
72℃ | 1kb/60s |
|
1 | 72℃ | 5min |
| 1 | 72℃ | 5min |
1 | 4℃ | 保温 |
| 1 | 4℃ | 保温 |
注意事项
1) 本品待溶解完全后使用,防止离子浓度不均匀。
2)菌液PCR时预变性时间≥5min,更有利于破壁。
3)应根据实验目的选择合适的循环数,循环数过少,会造成扩增量不足;循环数过多,扩增量增加,但突变率也会增加,并造成非特异性扩增。
4)一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃,无法得到理想的扩增效率时,适当降低退火温度;发生非特异性反应时,提高退火温度,由此优化反应条件。
质量控制
经检测无外源核酸酶残留,qPCR方法检测无大肠杆菌DNA残留,能有效扩增人基因组中的单拷贝基因。
产品用途
常规PCR鉴定(菌落PCR、基因鉴定);
小片段目标基因克隆;
平端PCR产物加A。
应用实例
图例:使用普通(A组)及含染料(B组)的2×Taq Master Mix配制的50μL扩增体系,以5ngλDNA为模板,对500bp~6.0kb片段的扩增结果。
仅供科研或生产使用,不用于临床诊断。